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医用试剂管中保存液的配置及使用方法

作者: 发布时间:2022-09-09 点击:443

  ①在医用试剂管中制作保存液时,称142.14gTris置于烧杯中,加入750mL蒸馏水,用磁力搅拌器搅拌溶解均匀,然后加入盐酸调节pH至7.6,并调节体积至1L以制备1mol/L Tris-HCL(pH7.6)。

  ②称取186.0克二水合乙二胺四乙酸二钠于烧杯中,加入750毫升蒸馏水,然后加入氢氧化钠调节pH值至7.6,并定容至1L,配制成0.5mol/L EDTA。

  ③称取20.0g月桂酰肌氨酸于烧杯中,缓慢搅拌,用蒸馏水溶解(泡沫较多),并定容至100mL,制成20%月桂酰肌氨酸溶液。

  ④将90毫升蒸馏水、10.6毫升1摩尔/升tris-HCl (pH 7.6)、4.2毫升0.5摩尔/升EDTA和100克氰基胍异硫酸盐置于烧杯中。在50℃加热并搅拌1小时,直到完全溶解。

  ⑤待上述溶液完全溶解后,加入21.1ml 20%月桂酰肌氨酸和2.12mL巯基乙醇,搅拌均匀,4℃保存(4℃放置时间较长会有结晶析出,但不影响使用效果,可在医用试剂管中的保存液一次性使用前加热融化)。

  PCR系统中样品浓度与Ct值的线性关系为66.6μLN基因假病毒(初始浓度为1×108 copies/mL),用试剂管提取RNA,然后用30μLDEPC水洗脱。加入体积为20μl的PC R反应体系中加入9μL纯化的R NA模板,根据换算,反应体系中假病毒的终浓度为1×108 copies/mL(忽略核酸提取过程中的损失)。用10倍梯度稀释n基因假病毒,使假病毒在PC R反应体系中的浓度梯度为:1×107、1×106、1×105、1×104和1×103 copies/mL,每个梯度平行制成三组。反应体系为20μl: 5μl快速病毒1步主混合液,0。4μL上游和下游引物和探针,4.8μL DEPC水和9μL模板。扩增程序:25℃2分钟;50℃15分钟;95℃2分钟;90℃ 15秒,60℃ 45秒,45个循环,在60℃采集荧光信号。